如何選擇倒置顯微鏡與熒光顯微鏡?
如何選擇倒置顯微鏡與熒光顯微鏡?
顯微鏡是細(xì)胞培養(yǎng)及相關(guān)衍生實(shí)驗(yàn)的重要儀器。目前市面上的顯微鏡種類繁多,選擇一款符合自己需求且適合的顯微鏡是一個(gè)挑戰(zhàn)。下面介紹倒置顯微鏡和熒光顯微鏡的原理,為您提供方便。
倒置顯微鏡的組成與普通顯微鏡相同,主要包括機(jī)械部分、照明部分、光學(xué)部分三部分。倒置顯微鏡的組成與普通正置顯微鏡相同,只是物鏡和照明系統(tǒng)倒置,前者在臺(tái)下,后者在臺(tái)上。這種結(jié)構(gòu)使聚光系統(tǒng)與載物臺(tái)的有效距離顯著擴(kuò)大,便于放置培養(yǎng)皿、細(xì)胞培養(yǎng)瓶(當(dāng)然是玻片等)等較厚的待觀察物體,并且在同時(shí)物鏡和材料之間的工作距離不必很大。倒置顯微鏡用于醫(yī)療衛(wèi)生單位、大專院校、科研院所的微生物、細(xì)胞、細(xì)菌、組織培養(yǎng)、懸浮液、沉淀物等的觀察。它可以連續(xù)觀察培養(yǎng)基中細(xì)胞和細(xì)菌的繁殖和分裂過程,并且可以對(duì)這個(gè)過程的任何形式進(jìn)行拍照。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、基因工程、工業(yè)微生物學(xué)、植物學(xué)等領(lǐng)域。
熒光顯微鏡用于研究化學(xué)物質(zhì)在細(xì)胞中的吸收、運(yùn)輸、分布和定位。對(duì)于被檢物體,產(chǎn)生熒光的方式有兩種:自體熒光,紫外線照射后直接發(fā)出熒光;二次熒光,將被觀察物體用熒光染料處理后,再用紫外光照射后發(fā)出熒光。細(xì)胞中的一些物質(zhì),如葉綠素,在受到紫外線照射后會(huì)產(chǎn)生自發(fā)熒光;雖然有些物質(zhì)本身不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色,在受到紫外線照射后也能發(fā)出二次熒光。熒光顯微鏡采用發(fā)光效率高的點(diǎn)光源,通過彩色濾光片系統(tǒng)發(fā)出一定波長(zhǎng)的光(紫外光365nm或紫藍(lán)光420nm)作為激發(fā)光,激發(fā)標(biāo)本中的熒光物質(zhì)發(fā)射各種顏色的熒光,然后通過放大物鏡和目鏡觀察。這樣,在強(qiáng)烈反差的背景下,即使是熒光光線非常微弱,易于識(shí)別,靈敏度高。主要用于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能及化學(xué)成分的研究。
熒光顯微鏡分為透射型和外延型兩種,前者更原始,后者更。兩種熒光顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)相似,主要區(qū)別在于:透射激發(fā)光穿過標(biāo)本,標(biāo)本整體產(chǎn)生熒光,熒光再次進(jìn)入物鏡。放大倍數(shù)越高,熒光越弱; Epi型激發(fā)光投射在試樣表面,試樣表面產(chǎn)生熒光,熒光進(jìn)入物鏡。放大倍數(shù)越高,熒光越強(qiáng),適合高倍觀察。熒光顯微鏡的主要部件有汞光源、激發(fā)濾光片、二向色鏡(外反射式)、加壓濾光片、暗場(chǎng)聚光鏡(透射式)等。另外,由于汞發(fā)熱嚴(yán)重?zé)?,其中大多?shù)還配備了吸熱過濾器。一些熒光顯微鏡還具有相差物鏡和環(huán)形光闌,因此可以進(jìn)行相差觀察。還有帶倒置鏡架的熒光顯微鏡、倒置顯微鏡等。
此外,上述顯微鏡可以通過安裝CCD組裝成數(shù)碼顯微鏡,CCD將顯微鏡看到的物理圖像通過數(shù)模轉(zhuǎn)換,使其在計(jì)算機(jī)上成像。因此,我們可以通過顯示器再現(xiàn)傳統(tǒng)普通雙目觀察對(duì)微觀領(lǐng)域的研究,從而提高工作效率。
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